Оценка иммуномодулирующей и противоопухолевой активности препарата «Меркурид»
Регистрационное свидетельство № UA/6098/01/01 на лекарственный препарат выдано МОЗ Украины и Государственным фармакологическим центром
Оценка иммуномодулирующей и противоопухолевой активности препарата «Меркурид»
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ УКРАИНЫ
Отдел патоморфологии и иммунологии Украинского НИИ глазных болезней и тканевой терапии им. В.П. Филатова Утверждаю зам.директора ИГБ и ТТ д.м.н., проф. В.В. Вит
ОТЧЕТ Оценка иммуномодулирующей и противоопухолевой активности препарата «Меркурид»
Анализ полученных данных позволяет говорить о наличии иммуномодулирующей и противоопухолевой активности у всех исследовавшихся препаратов группы "Меркурид". Изучение сыворотки крови 195 онкологических больных с подтвержденным диагнозом, показало, что "Меркурид" способен связываться и элиминировать онкоассоциированные белки, восстанавливая тем самым рецепторную чувствительность Т- лимфоцитов. Подтверждением этому служат наши наблюдения связанные с оценкой функциональной активности Т-лимфоцитов в ходе лечения "Меркуридом". Так, благоприятная клиническая реверсия в ходе лечения онкобольных, сопровождалась повышением относительно числа Т-лимфоцитов и увеличением цитотоксической активности естественных киллеров. Иммуномодулирующее действие заключается в активирование всех факторов естественной резистентности: клеток моноцитарно-макрофагальной системы, нейтрофилов и NK-клеток, вызывая повышение их функциональной активности при исходно сниженных показателях. Активация макрофагов ведет к усилению синтеза практически всех цитокинов, вырабатываемых этими клетками. Следствием этого является усиление функциональной активности факторов как клеточного, так и гуморального иммунитета. В конечном итоге под влиянием меркурида в движение приходит вся иммунная система организма, и это движение соответствует естественному ходу активации иммунитета, наблюдаемого при развитии любого иммунного ответа. Меркурид не затрагивает ненарушенные этапы иммуногенеза, однако при дисбалансе показателей иммунной системы нормализует их. Меркурид регулирует: 1.Синтез цитокинов макрофагами (ИЛ-1, ИЛ-6, ФНО-альфа) и лимфоцитами (ИЛ-2); 2.Усиливает фагоцитоз; 3.Пролиферацию Т-лимфоцитов; 4.Пролиферацию ЕК-клеток; 5. Синтез антител; 6.Стимулирует синтез интерферона. Противоопухолевые свойства заключаются в повышение цитотоксической активности NK-клеток (особенно при её снижении), увеличение функциональной активности CD-8 Т-киллеров. Стимулирование макрофагов меркуридом способствует выделению фактора некроза опухоли (ФНО), который способен разрушать опухолевые клетки, вызывая их апоптоз. Меркурид активирует синтез ФНО-альфа только у людей с исходно низкими или средними уровнями его продукции. У лиц с исходно высокими уровнями меркурид не оказывает влияния или несколько понижает продукцию этого цитокина. Такие свойства меркурида исключают возможность гиперактивации иммунной системы под его влиянием. Меркурид подвергает денатурации онкоассоциированные белки, повышая иммуногенность опухолевых клеток, что приводит к лизису измененных клеток. Следует отметить, что денатурации подвергаются только онкоассоциированные белки, что выгодно отличает "Меркурид" от цитостатиков, которые денатурируют нормальные белки, участвующие в различных физиологических процессах. Накапливаясь в сыворотке крови онкоассоциированные белки, адсорбируются на клеточной мембране целого ряда клеток, и главным образом — иммунной системы, ограничивая их функциональную активность. Наличие таких белков, в частности, при беременности (онко-фетальные протеины), возможно, имеют защитную роль — нивелирует иммунную реакцию матери против плода. В большинстве же случаев, появление таких белков имеет негативные последствия. Адсорбция этих белков на клеточных мембранах клеток, в том числе и лимфоцитов, приводит к нарушению реологии крови, иммунного гомеостаза, детоксикационных и др. механизмов поддержания нормального жизнеобеспечения, что, в конечном счете, проявляется синдромом опухолевой интоксикации, вызывая уменьшение активности иммунной системы (прежде всего, клеточного звена). Связываясь с подобными белками в сыворотке крови Меркурид способствует их элиминации и тем самым освобождает рецепторы Т- лимфоцитов от таких белков, что повышает функциональную активность иммунной системы и снижает явления опухолевой интоксикации. Полученные данные позволяют говорить о наличии выраженного иммуномодулирующего и противоопухолевого эффекта у всех тестируемых препаратов, что позволяет рассматривать их как перспективные для профилактики и лечения онкологического процесса в сочетании с традиционными методами лечения. МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ УКРАИНЫ Отдел патоморфологии и иммунологии Украинского НИИ глазных болезней и тканевой терапии им. В.П. Филатова Утверждаю зам.директора ИГБ и ТТд.м.н., проф. В.В. Вит ПРОТОКОЛ Изучение иммуномодулирующей и противоопухолевой активности препарата «Меркурид» Проводилась оценка иммуномодулирующего и противоопухолевого эффекта патентованного лекарства «Меркурид», представляющего собой, комплекс атома ртути (в виде хелатного соединения) с аминокислотами — цистеин и метионин, отмеченных символами: «Ц», «М». Критерием иммуномодулирующей, противоопухолевой активности служил нагрузочный тест с Е-РОК, проводившийся в условиях стандартной инкубации лимфоцитов, образующих розетки с эритроцитами барана, с перечисленными выше препаратами. Тест включает две фазы: -определение относительного (%) количества Т-лимфоцитов по тесту спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Е-РОК). -определение %-ного количества Т-лимфоцитов по тесту Е-РОК после инкубации с лекарственным препаратом. Объектом исследования служила лейкоцитарно — лимфоцитарная (Л/Л) взвесь клеток, полученных согласно методическим рекомендациям «Ускоренная первичная оценка иммунологического статуса человека» (1). Постановка метода включает следующие этапы: -Л/Л взвесь клеток по 0,05мл раскапывалась в лунки иммунологической планшеты. Первая лунка — контрольная (добавляется 0,05мл среды 199), в остальные добавляется тестируемый препарат. -инкубация Л/Л взвеси в термостате в течение 30 мин. при Т=37гр.С. -добавление в лунки 0,05 мл эритроцитов барана в стандартной концентрации (0,02%), -инкубация 5 мин. при комнатной температуре и приготовление мазков. -подсчет относительного количества активных Е-РОК на 100 клеток лимфоцитарного ряда в контроле и опыте. Согласно современным представлениям, медикаментозная иммуномодуляция является следствием соединения лекарственного препарата с рецепторами клетки. В механизме этого соединения некоторые авторы усматривают аналогию с реакцией антиген-антитело. Модулирующий эффект напрямую связан с исходным состоянием пациентов, наличием того или иного патологического процесса. Особое место здесь занимает опухолевая патология, характеризующаяся накоплением в тканевых средах и плазме большого количества онкоассоциированных белков, отличающихся повышенной конформационной лабильностью в отношении целого ряда лекарственных веществ (2). Адсорбция этих белков на клеточных мембранах клеток, в том числе и лимфоцитов, приводит к нарушению реологии крови, иммунного гомеостаза, детоксикационных и др. механизмов поддержания нормального жизнеобеспечения, что, в конечном счете, проявляется синдромом опухолевой интоксикации. Способность лекарственного препарата взаимодействовать с мембранными адсорбированными белками следует рассматривать как положительный момент и один из главных факторов иммуномодуляции. В основе такого взаимодействия лежит денатурация онкоассоциированного белка, сопровождающаяся освобождением его с поверхности клеточной мембраны с восстановлением нормальной клеточной активности (3). Исходя из фармакоиммунологической оценки данного эффекта, иммуномодулирующее воздействие лекарственного препарата можно оценивать по аналогии со степенью сенсибилизации к аутоантигенам (1). Так, различают незначительную сенсибилизацию — ингибирование Е-РОК в пределах 5-10%, выраженную — до 15% и высокую — свыше 15%. Влияние препаратов на Е-РОК нами изучено у 195 больных: рак молочной железы (26), рак щитовидной железы (8), рак легкого (22), рак пищевода (11), рак желудка (17), рак ободочной кишки (10), рак прямой кишки (15), рак печени (9), рак поджелудочной железы (5), рак почки (8), рак мочевого пузыря (14), рак предстательной железы (19), рак шейки матки (12), рак тела матки (9), рак яичника (10). Влияние тестируемых препаратов на Е-РОК отражено в нижеприводимой таблице. Нозология%-ное изменение Е-РОК после инкубации с препаратом «Ц»«М» Рак молочной железы18.6 ± 2.017.6 ± 2.0 Рак щитовидной железы16.2 ± 1.416.7 ± 8.6 Рак легкого15.3 ± 9.514.0 ± 7.0 Рак пищевода15.3 ± 4.019.2 ± 3.8 Рак желудка18.9 ± 3.417.7 ± 5.3 Рак ободочной кишки13.5 ± 5.214.0 ± 4.3 Рак прямой кишки16.3 ± 7.813.7 ± 5.2 Рак печени16.0 ± 1.817.6 ± 2.8 Рак поджелудочной железы14.2 ± 2.115.1 ± 4.5 Рак почки15.7 ± 4.917.9 ± 5.2 Рак мочевого пузыря12.3 ± 2.314.0 ± 4.8 Рак предстательной железы15.6 ± 1.816.7 ± 2.1 Рак шейки матки17.2 ± 1.816.7 ± 2.5 Рак тела матки14.3 ± 4.014.0 ± 4.6 Рак яичника17.3 ± 8.518.0 ± 5.0 Представленные данные позволяют сделать выводы о иммуномодулирующих свойствах тестируемых препаратов. Иммуномодулирующая активность в отношении опухолевых лимфоцитов у всех тестируемых препаратов находится примерно на одном уровне и может быть оценена на уровне выраженной — высокой сенсибилизации. Кроме того, надо отметить, что в ходе лечения меркуридом у данных больных, как правило, отмечалось снижение данных показателей до 6-8%. Таким образом, «Меркурид» показал способность взаимодействовать с мембранными адсорбированными белками, что рассматривается как положительный момент и один из главных факторов иммуномодуляции. В основе такого взаимодействия лежит денатурация онкоассоциированных белков, сопровождающееся освобождением его с поверхности клеточной мембраны с восстановлением нормальной клеточной активности. Следует отметить, что денатурации подвергаются только онкоассоциированные белки, что выгодно отличает «Меркурид» от цитостатиков, которые денатурируют нормальные белки, участвующие в различных физиологических процессах. Механизм иммунотропного влияния Меркурида Иммуномодулирующий эффект Меркурида можно рассматривать как частное проявление его саногенного влияния. Последнее же свойство является следствием тропности Меркурида к тиолдисульфидным белковым связям. Как известно, через тиолдисульфидные взаимодействия осуществляются важнейшие конформационные преобразования белков, обуславливающие их биологическую активность. Наши предыдущие исследования показали, что при патологических процессах (в частности, злокачественном росте) в организме появляется широкий спектр белков, обладающих конформационной неустойчивостью, проявляющейся освобождением свободных небелковых -SH групп при взаимодействии с рядом лекарственных препаратов. Этот феномен изучался нами на примере сывороточных белков онкобольных. В частности, добавление меркурида в тест систему приводило к появлению небелковых -SH групп у многих больных. Биохимическая интерпретация этого феномена, по-нашему мнению, может быть представлена через механизм антиоксидантной защиты белковых молекул в организме, осуществляемой глютатионом. Именно глютатион является фактически основным носителем небелковых -SH групп. В норме он отсутствует в сыворотке, т.к. связан с белковой молекулой. При целом ряде патологических процессов (особенно с активацией аутоиммунных взаимодействий) мы обнаруживаем появление свободных небелковых -SH групп в нативной сыворотке крови. В других случаях (при отсутствии небелковых -SH групп в нативной сыворотке), они могут появляться после инкубации ее с лекарственным препаратом (в частности, Меркуридом). Этот феномен характерен для целого ряда патологических состояний, но отсутствует в норме, он обусловлен присутствием атипичных (конформационнно-лабильных) белков. Накапливаясь в сыворотке крови такие белки, адсорбируются на клеточной мембране целого ряда клеток, и главным образом — иммунной системы, ограничивая их функциональную активность. Наличие таких белков, в частности, при беременности (онко-фетальные протеины), возможно, имеют защитную роль — нивелирует иммунную реакцию матери против плода. В большинстве же случаев, появление таких белков имеет негативные последствия, вызывая в той или иной мере уменьшение активности иммунной системы (прежде всего, клеточного звена). Можно полагать, что связываясь с подобными белками в сыворотке крови (о возможности этого свидетельствует проводившийся нами тест на сывороточных белках больных), Меркурид способствует их элиминации и тем самым постепенно освобождает рецепторы Т- лимфоцитов от таких белков. Подтверждением этому могут служить наши наблюдения, связанные с изменением функциональной активности Т-лимфоцитов в ходе лечения Меркуридом. Так, благоприятная клиническая реверсия в ходе лечения онкобольных, сопровождалась повышением относительно числа Т-лимфоцитов и увеличением цитотоксической активности естественных киллеров. Р Е 3 Ю М Е Полученные данные позволяют говорить о наличии выраженного иммуномодулирующего и противоопухолевого эффекта у всех тестируемых препаратов, что позволяет их рекомендовать при целом ряде хронических процессов (аллергии, вирусные инфекции, аутоиммунная патология), а также при онкологическом процессе в сочетании с традиционными методами лечения. Литература: 1.Дегтяренко Т.В., Макулькин Р.Ф. «Биогенные стимуляторы и иммунореактивность», т.11 (Иммунореабитиация биорегуляторами), Одесса, 1997-194с. 2.Кресюн В.Й., Костюшов В.В., Тимчишин О.Л. и др. «Клінічна фармація» -1999.-т.З.-№2.-с.60-64. 3.Артемов А.В. "Нетоксическая лекарственная терапия рака: патофизиологические механизмы и клинические особенности, ИД «Ридер», Харьков, 2002.-244с. 4. Белоусова А.К. Молекулярно-биологические подходы к терапии опухолей.М.:ВИНИТИ,1999.-203с. 5. Возианов А.Ф., Бутенко А.К., Зак К.П. Цитокины: биологическое и противоопухолевое свойства. К.: Наукова думка.,1998-320с. 6. Глузман Д.Ф. Иммуногистохимия в диагностике злокачественных опухолей.// Онкология,1989.-№3.-с.197-208. 7. Ровенский Ю.А. Клеточные и молекулярные механизмы опухолевой инвазии. //Биохимия.1998.-т.63.-с.1204-1221.
